?2025年6月9日，為規(guī)范技術(shù)審評要求，進(jìn)一步指導(dǎo)注冊申請人對申報資料的準(zhǔn)備和撰寫，國家藥監(jiān)局組織制定了《軟組織再生型疝修補(bǔ)補(bǔ)片動物試驗研究技術(shù)審評要點（征求意見稿）》，并面向社會公開征求意見。
2025年6月9日，為規(guī)范技術(shù)審評要求，進(jìn)一步指導(dǎo)注冊申請人對申報資料的準(zhǔn)備和撰寫，國家藥監(jiān)局組織制定了《軟組織再生型疝修補(bǔ)補(bǔ)片動物試驗研究技術(shù)審評要點（征求意見稿）》，并面向社會公開征求意見。
軟組織再生型疝修補(bǔ)補(bǔ)片動物試驗技術(shù)審評要點（征求意見稿）
為了進(jìn)一步規(guī)范軟組織再生型疝修補(bǔ)補(bǔ)片（以下簡稱為“再生型疝補(bǔ)片”）動物試驗，并指導(dǎo)該類產(chǎn)品注冊申請人進(jìn)行動物試驗設(shè)計及注冊資料準(zhǔn)備，制定本審評要點。
本審評要點系對再生型疝補(bǔ)片的一般要求，注冊申請人需依據(jù)具體產(chǎn)品的特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化，并確定其中的具體內(nèi)容是否適用。
本審評要點是對注冊申請人和審評人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求且更為科學(xué)的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。需在遵循相關(guān)法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的前提下使用本審評要點。
本審評要點是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本審評要點相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時的調(diào)整。
一、適用范圍
疝修補(bǔ)補(bǔ)片從修復(fù)機(jī)理考慮可劃分為兩種類型，第一種是不可吸收疝補(bǔ)片及瘢痕組織共同作用對缺損的軟組織進(jìn)行修復(fù)，第二種是可吸收疝補(bǔ)片植入后形成重塑及再生的天然宿主組織對缺損的軟組織進(jìn)行修復(fù)，本審評要點適用于后者。在該類產(chǎn)品進(jìn)行臨床研究前，一方面需要開展動物試驗以保護(hù)臨床受試者的安全，另一方面考慮到臨床試驗中很難直接觀察到補(bǔ)片在人體內(nèi)的降解吸收及組織再生情況，所以必須開展相關(guān)動物試驗，對再生型疝補(bǔ)片對缺損軟組織的再生修復(fù)情況進(jìn)行評價，以控制器械疝復(fù)發(fā)等相關(guān)并發(fā)癥的風(fēng)險。
本審評要點主要是對再生型疝補(bǔ)片再生功效評價相關(guān)的動物試驗的基本要求。對于采用新材料、新設(shè)計的疝補(bǔ)片，注冊申請人宜根據(jù)產(chǎn)品特性及試驗?zāi)康拈_展更深入的動物試驗研究，如選擇多個種屬的實驗動物、結(jié)合材料降解特性設(shè)置隨訪時間、選擇相應(yīng)的統(tǒng)計學(xué)方法等。另外需注意，當(dāng)注冊申請人考慮同時對產(chǎn)品可行性、安全性、其他有效性等進(jìn)行綜合性評價時，例如對疝補(bǔ)片皺縮情況、移位情況、生物相容性等項目進(jìn)行評價，動物試驗設(shè)計要素可能會與本審評要點存在差異。
二、動物試驗設(shè)計的考慮因素
（一）動物種類及模型建立
選擇適用的實驗動物進(jìn)行疝補(bǔ)片再生功效情況的動物試驗研究。注冊申請人需對動物試驗中所采用動物的適用性進(jìn)行分析，提供動物種類選擇及模型建立的確定依據(jù)，如參考文獻(xiàn)或前期探索性動物試驗資料等。
考慮到實驗動物與人體在腹壁解剖結(jié)構(gòu)、疝缺損程度等方面的可比性，建議選擇一定數(shù)量的某種成年大型動物（如豬等）進(jìn)行動物試驗研究。對于由未在境內(nèi)外市售再生型疝補(bǔ)片中使用過的新材料制備的器械，建議先選擇某種成年小型動物（如大鼠等）進(jìn)行可行性動物試驗研究。報告中詳細(xì)描述實驗動物的來源、背景、規(guī)格、微生物與寄生蟲控制級別等。
對于疝及腹壁缺損修復(fù)有效性的評價應(yīng)建立疝缺損動物模型。實驗動物常規(guī)麻醉后，褪去腹部毛發(fā)，切開皮膚及皮下組織，雙側(cè)乳頭線外側(cè)約3cm切開皮下組織，長度15cm，切除腹壁肌肉及筋膜全層，保留皮膚、皮下組織及腹膜。大型動物一般可得3cm×5cm缺損，小型動物可得1.5cm×1.5cm（或2cm×2cm）缺損。
缺損造模后直接用補(bǔ)片進(jìn)行修補(bǔ)。補(bǔ)片覆蓋范圍至少超過缺損邊緣3cm。根據(jù)受試樣品預(yù)期臨床使用方法進(jìn)行修補(bǔ)操作，補(bǔ)片放置于腹膜外，不關(guān)閉缺損，補(bǔ)片中央?yún)^(qū)域與缺損縫合一圈。必要時，制作內(nèi)引流，在腹膜上打孔。將補(bǔ)片以疝環(huán)缺損為中心完全覆蓋缺損，確保補(bǔ)片鋪平且完全貼合腹壁。間斷縫合固定補(bǔ)片，在低張力狀態(tài)下覆蓋腹壁缺損?？p合皮下筋膜和皮膚切口。
術(shù)后1周內(nèi)每日肌肉注射抗生素消炎，皮膚縫合處每日以碘伏消毒。
（二）對照的選擇
宜選擇材質(zhì)、結(jié)構(gòu)、生產(chǎn)工藝、適用范圍等方面最相似的境內(nèi)已上市軟組織再生型疝補(bǔ)片產(chǎn)品作為動物試驗的對照器械，詳細(xì)描述產(chǎn)品名稱、規(guī)格/型號、批號、數(shù)量、臨床適應(yīng)證。在開展新生組織的機(jī)械性能研究時可與自然腹壁進(jìn)行比較?？紤]隨機(jī)化的設(shè)計并予以描述。
一般采用單只動物分別植入申報產(chǎn)品或?qū)φ债a(chǎn)品的設(shè)計。若動物試驗僅評價疝補(bǔ)片與組織的局部作用及反應(yīng)，且動物大小允許，可在腹壁兩側(cè)缺損位置分別植入實驗組及對照組補(bǔ)片。
（三）評價指標(biāo)的選擇
1．一般項目觀察評價
于術(shù)前、術(shù)后7天內(nèi)每天測量并記錄動物體溫，確認(rèn)有無異常。如有異常，應(yīng)持續(xù)觀察至體溫恢復(fù)正常。觀察所有動物的活動與進(jìn)食情況。每周記錄體重變化。
于術(shù)后7天每天觀察術(shù)后切口愈合情況，按照確定切口愈合等級并記錄，參照YY/T 1754.3-2023判定切口清潔程度和愈合等級，見表1，由未參與實驗的專業(yè)人員評判分級并記錄。如有異常，應(yīng)持續(xù)觀察記錄。
表1 切口清潔程度和愈合等級
級別 | 清潔程度 | 愈合等級 |
一類 | 清潔，無菌切口 | 甲級愈合，切口拆線后一次性愈合，沒有感染 |
二類 | 相對清潔，可能會污染的切口 | 乙級愈合，切口有感染，或拆線后切口裂開，經(jīng)換藥或清創(chuàng)縫合后愈合 |
三類 | 被污染或有感染的切口 | 丙級愈合，切口裂開或感染，沒有愈合 |
于術(shù)前、術(shù)后2周、處死時取血并收集血樣，檢測血常規(guī)（紅細(xì)胞計數(shù)，白細(xì)胞計數(shù)，血紅蛋白，中性粒細(xì)胞計數(shù)，淋巴細(xì)胞計數(shù)，血小板計數(shù)）、凝血（ACT、纖維蛋白原）、血生化（總蛋白、白蛋白、球蛋白、ALT、AST、GGT、膽紅素、肌酐、尿素氮）。如有異常，進(jìn)一步分析原因。
2. 疝復(fù)發(fā)及修復(fù)效果評價
（1）疝復(fù)發(fā)情況
術(shù)后4周，直視觀察確認(rèn)修復(fù)區(qū)有無疝復(fù)發(fā)（以觀察到明顯疝環(huán)或腹部體表明顯凸起、凸起高度超過1cm確認(rèn)發(fā)生疝復(fù)發(fā)）。若發(fā)現(xiàn)疝復(fù)發(fā)，應(yīng)確認(rèn)疝復(fù)發(fā)因素為手術(shù)因素（補(bǔ)片固定脫離）或補(bǔ)片因素（補(bǔ)片降解后無再生組織），并進(jìn)行記錄。
（2）修復(fù)效果觀察
處死動物，進(jìn)行下列指標(biāo)的檢查：
補(bǔ)片修復(fù)部位感染、補(bǔ)片降解情況。
補(bǔ)片狀態(tài)：觀察并記錄血清腫/血腫、補(bǔ)片位移、固定脫落、折疊等。
沿腹膜完整取下各組補(bǔ)片的修復(fù)區(qū)及周圍1cm組織。測量重塑及再生組織面積和厚度：修復(fù)區(qū)域內(nèi)選擇10個點測量其厚度，記錄數(shù)值并計算平均值，并與對照樣品組進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。選擇的測試點應(yīng)能代表整個修復(fù)區(qū)的修復(fù)情況。
3. 組織病理學(xué)評價指標(biāo)
組織病理學(xué)可觀察補(bǔ)片植入后的炎癥反應(yīng)、新生膠原排列形態(tài)、補(bǔ)片降解吸收等情況，對評價組織重塑及再生非常重要。
收集完整的修復(fù)區(qū)以及至少5 mm相鄰組織，取材深度包括整個植入?yún)^(qū)組織連同其覆蓋的腹膜，沿組織中線、動物身長方向切開將組織分為兩部分，一部分用于生物力學(xué)性能評價，另一部分用于組織病理學(xué)評價，將取材標(biāo)本沿同一對角線方向切開后取連續(xù)組織塊依次分別切片后做病理檢查，將用于組織病理評估的組織完整地放入10％中性福爾馬林中。待組織完全固定，常規(guī)方法制作石蠟切片，分別進(jìn)行組織學(xué)染色。
通過HE染色可以觀察修復(fù)區(qū)炎性細(xì)胞浸潤、組織反應(yīng)、補(bǔ)片降解、鈣化情況。通過Masson和天狼星紅染色顯示膠原纖維及其分型，從而對修復(fù)區(qū)的組織結(jié)構(gòu)和功能評價提供支持。
按表2和表3記錄重塑及再生組織區(qū)炎癥細(xì)胞類型/反應(yīng)和組織反應(yīng)。按表4和表5進(jìn)行反應(yīng)類型的半定量記分。
表2 修復(fù)組織區(qū)炎癥細(xì)胞類型/反應(yīng)
細(xì)胞類型/反應(yīng) | 記分 |
0 | 1 | 2 | 3 | 4 |
多形核白細(xì)胞 | 0 | 極少，1～5/phfa | 6～10/phf | 重度浸潤 | 滿視野 |
淋巴細(xì)胞 | 0 |
漿細(xì)胞 | 0 |
巨噬細(xì)胞 | 0 |
巨細(xì)胞 | 0 | 極少，1～2/phf | 3～5/phf | 重度浸潤 | 成片分布 |
壞死 | 0 | 極少 | 輕微 | 中度 | 重度 |
a phf= 每高倍（400×）視野。 |
表3 修復(fù)組織區(qū)組織反應(yīng)
反應(yīng) | 記分 |
0 | 1 | 2 | 3 | 4 |
新血管形成 | 0 | 輕微毛細(xì)血管增生，局灶性，1～3個芽 | 4～7組毛細(xì)血管增生，輔以成纖維細(xì)胞結(jié)構(gòu) | 較大范圍的毛細(xì)血管增生，輔以成纖維細(xì)胞結(jié)構(gòu) | 廣泛毛細(xì)血管增生，輔以成纖維細(xì)胞結(jié)構(gòu) |
纖維化 | 0 | 局限性區(qū)域 | 中度厚區(qū)域 | 厚區(qū)域 | 廣泛區(qū)域 |
脂肪浸潤 | 0 | 極少量脂肪細(xì)胞，伴纖維化 | 數(shù)層脂肪細(xì)胞和纖維化 | 植入部位脂肪細(xì)胞聚集區(qū)域延伸擴(kuò)大 | 植入物周圍完全被脂肪細(xì)胞包繞 |
細(xì)胞浸潤 | 0 | 細(xì)胞與支架外表接觸，未浸入支架內(nèi)部 | 細(xì)胞浸入支架，但未到中央?yún)^(qū)域 | 細(xì)胞浸入到支架中央?yún)^(qū)域 | 完全浸入 |
ECM沉積 | 0 | 宿主ECM沉積在支架外表 | 宿主ECM沉積到支架內(nèi)部，但未到中央?yún)^(qū)域 | 宿主ECM沉積到支架內(nèi)部，包括中央?yún)^(qū)域 | 完全沉積 |
補(bǔ)片支架降解 | 0 | 支架部分降解，被細(xì)胞、血管、宿主組織等分層 | 支架大部分降解，結(jié)構(gòu)崩解 | 支架嚴(yán)重降解，難以與宿主組織區(qū)分 | 支架完全降解 |
表4 組織學(xué)半定量評價系統(tǒng)
組別 類型 | 試驗樣品組 | 對照樣品組 |
多形核白細(xì)胞 |
|
|
淋巴細(xì)胞 |
|
|
漿細(xì)胞 |
|
|
巨噬細(xì)胞 |
|
|
巨細(xì)胞 |
|
|
壞死 |
|
|
試驗樣品與對照樣品判定標(biāo)準(zhǔn)為：
——無刺激或極輕微刺激（0.0～2.9）；
——輕微刺激（3.0～8.9）；
——中度刺激（9.0～15.0）；
——重度刺激（≥15.1）。
表5 組織重塑再生評價示例
組別 類型 | 試驗樣品組 | 對照樣品組 |
細(xì)胞浸潤 |
|
|
組織長入 |
|
|
脂肪浸潤 |
|
|
纖維化 |
|
|
補(bǔ)片支架降解 |
|
|
新血管形成 |
|
|
ECM沉積 |
|
|
4. 生物力學(xué)性能
生物力學(xué)性能對于評價疝補(bǔ)片的再生修復(fù)療效十分重要。在再生型疝補(bǔ)片植入后，材料與新生組織的結(jié)合體共同發(fā)揮對缺損組織進(jìn)行修復(fù)的作用，需要在不同的時間點完整取下修復(fù)區(qū)域疝補(bǔ)片材料與再生組織結(jié)合體，進(jìn)行如拉伸強(qiáng)度或頂破強(qiáng)度等生物力學(xué)性能的測試。
注冊申請人需繪制軟組織再生型疝補(bǔ)片生物力學(xué)性能與植入時間相關(guān)的擬合曲線，對比該曲線最低值與該生物力學(xué)性能臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)的大小，評價補(bǔ)片降解與組織再生速率的匹配性。理想的軟組織再生型疝補(bǔ)片應(yīng)在植入后直至完全降解、再生修復(fù)完成的整個過程中均保持足夠的生物力學(xué)性能。
（1）頂破強(qiáng)度：盡可能大地取出樣品，取出的組織試樣離體后，保持組織濕潤并立即檢測，如樣品太干，復(fù)水后檢測。測試方法見YY/T 0500-2021中探頭破裂強(qiáng)度法，對結(jié)果進(jìn)行分析。
（2）拉伸強(qiáng)度：取出的組織試樣離體后，保持組織濕潤并立即檢測，如樣品太干，復(fù)水后檢測。若豬作為實驗動物，分別裁剪寬度不小于10mm，長度不小于50 mm組織試樣各3塊（若不能滿足上述尺寸，盡可能裁剪出規(guī)則形狀的條狀樣品），記錄組織試樣厚度、寬度。將試樣兩端固定于萬能拉力試驗機(jī)夾具，兩夾具間距約20 mm，按照100 mm/min的速度穩(wěn)定拉伸，直至組織試樣斷裂，記錄單位寬度的最大拉伸力與位移，對結(jié)果進(jìn)行分析。
注：樣品制備過程中，若補(bǔ)片各向異性，未完全降解且易于觀察的情況下，盡可能按照樣品的不同方向取樣。
如樣品數(shù)量限制無法完成兩項生物力學(xué)試驗，優(yōu)先測量樣品的頂破強(qiáng)度。
5. 免疫生化分析：
免疫生化檢測對再生型疝補(bǔ)片的再生修復(fù)功效評價也有一定的參考價值。根據(jù)檢測目的可大致分為炎癥反應(yīng)因子（如TNF-A、TGF-β1）、血管生成相關(guān)因子（如VEGF、CD31）、肌細(xì)胞生成相關(guān)因子（如肌球蛋白、肌細(xì)胞生成素）、巨噬細(xì)胞分型（M1及M2）、膠原蛋白（Ⅰ型、Ⅲ型）、細(xì)胞外基質(zhì)沉積。免疫生化檢測應(yīng)該與組織病理學(xué)結(jié)果聯(lián)合進(jìn)行分析，目前尚未形成統(tǒng)一的評分標(biāo)準(zhǔn)，可根據(jù)動物試驗?zāi)康膩磉x擇合適的指標(biāo)進(jìn)行檢測。
6．不良反應(yīng)
對安全性事件或異常進(jìn)行記錄和分析，如發(fā)生感染、漿液腫（積液、血清腫）、臟器侵蝕、出血、死亡等，應(yīng)詳細(xì)分析死亡原因，分析與受試樣品的相關(guān)性。
（四）觀察時間點的選擇
一般情況下，需結(jié)合再生型疝補(bǔ)片的降解特性、動物種類、評價指標(biāo)等因素綜合確定術(shù)后解剖及觀察時間點。應(yīng)采用連續(xù)觀察的方式，對于大鼠等小型動物，一般觀察到產(chǎn)品預(yù)期完全降解的時間，如3個月內(nèi)降解，可以在第1、2、4、8、12周處死；對于豬等大動物，一般也應(yīng)觀察到產(chǎn)品預(yù)期完全降解的時間，如5個月內(nèi)降解，在術(shù)后4、12、24周等適宜的時間點處死，根據(jù)植入材料的數(shù)量及研究設(shè)計取材。
（五）實驗樣本量及結(jié)果分析
1．樣本量
一般情況下，動物試驗樣本量需結(jié)合再生型疝補(bǔ)片的降解特性、試驗設(shè)計類型、評價指標(biāo)、評價方法的準(zhǔn)確性、試驗器械及對照器械的情況、實驗用動物的變異性、外科手術(shù)操作的一致性、試驗中動物的預(yù)期損耗率、分析數(shù)據(jù)所用的統(tǒng)計學(xué)方法等因素來綜合確定，并需有統(tǒng)計學(xué)考慮?？蓪F(xiàn)有的試驗數(shù)據(jù)作為確定樣本量的參考，包括文獻(xiàn)報道的動物試驗或申報產(chǎn)品的預(yù)試驗情況。注冊申請人應(yīng)在注冊資料中提交動物試驗樣本量的確定依據(jù)。
2．結(jié)果分析
定量指標(biāo)的統(tǒng)計描述將計算均值、標(biāo)準(zhǔn)差、中位數(shù)、最小值、最大值，下四分位數(shù)（Q1），上四分位數(shù)（Q3）；分類指標(biāo)的統(tǒng)計描述各類的例數(shù)、發(fā)生率及構(gòu)成比。
動物試驗若采用單只動物分別植入申報產(chǎn)品或?qū)φ债a(chǎn)品的設(shè)計，對兩組一般情況的比較將根據(jù)指標(biāo)的類型采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行分析，定量資料的組間比較采用成組t檢驗或Wilcoxon秩和檢驗，分類數(shù)據(jù)采用卡方檢驗或精確概率法；等級資料采用Wilcoxon秩和檢驗。
動物試驗結(jié)論需包括統(tǒng)計學(xué)分析與生物學(xué)數(shù)據(jù)分析的綜合評價結(jié)果。
三、其他應(yīng)注意的問題
為保證動物試驗結(jié)果真實、可靠，應(yīng)使用質(zhì)量合格的實驗動物或檢疫合格的實驗用動物。建議在具備動物試驗資質(zhì)（如：有關(guān)部門頒發(fā)的動物試驗資格證明文件）的機(jī)構(gòu)開展動物試驗。注冊申請人需與動物試驗實施單位簽訂合同并共同設(shè)計、制訂動物試驗方案，上述資料作為產(chǎn)品質(zhì)量體系管理文件存檔。注冊時提交注冊申請人與動物試驗實施單位共同確認(rèn)并簽章的動物試驗報告，另外建議提供動物試驗實施單位的資質(zhì)文件。
為保證動物試驗的研究質(zhì)量，應(yīng)盡量避免不同術(shù)者手術(shù)操作差異、動物麻醉死亡、手術(shù)死亡、術(shù)后感染及其他意外情況對產(chǎn)品評價產(chǎn)生影響。建議注冊申請人邀請有經(jīng)驗的經(jīng)過培訓(xùn)的專業(yè)人員進(jìn)行評價。注冊申請人需保存詳細(xì)的試驗情況記錄及分析資料，包括以下適用的內(nèi)容：所有受試品及對照品信息、動物飼養(yǎng)記錄、鎮(zhèn)痛麻醉記錄、手術(shù)過程記錄、原始病理照片、手術(shù)切片、手術(shù)錄像等實驗原始資料、對動物麻醉死亡等非預(yù)期事件的有關(guān)證據(jù)及分析資料等。為了保證數(shù)據(jù)的溯源性，上述資料需作為產(chǎn)品質(zhì)量管理體系文件存檔。
四、參考文獻(xiàn)：
[1]醫(yī)療器械動物試驗研究注冊審查指導(dǎo)原則 第一部分：決策原則:國家藥品監(jiān)督管理局2021年第75號[Z].
[2]醫(yī)療器械動物試驗研究注冊審查指導(dǎo)原則 第二部分：試驗設(shè)計、實施質(zhì)量保證:國家藥品監(jiān)督管理局2021年第75號[Z].
[3]GB/T 16886, 醫(yī)療器械生物學(xué)評價系列標(biāo)準(zhǔn)[S].
[4]YY/T1912-2023, 用于軟組織再生醫(yī)療器械的生物學(xué)評價與試驗[S].
[5] Wenbo Liu, etal. Regulatory science for hernia mesh: Current status and future perspectives[J]. Bioactive Materials, 2021, 6:420-432.
[6]YY/T1754.3-2023, 醫(yī)療器械臨床前動物研究 第3部分：用于評價補(bǔ)片組織學(xué)反應(yīng)與生物力學(xué)性能的動物腹壁切口疝模型[S].