EB病毒抗體檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則（2022年第36號）旨在指導(dǎo)注冊申請人對EB病毒抗體檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。本指導(dǎo)原則是針對EB病毒抗體檢測試劑注冊審查的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。
EB病毒抗體檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對EB病毒抗體檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。
本指導(dǎo)原則是針對EB病毒抗體檢測試劑注冊審查的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。
本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要詳細(xì)闡明理由，并對其科學(xué)合理性進(jìn)行驗證，提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍
EB病毒(Epstein－Barr virus，EBV)為皰疹病毒科，皰疹病毒IV型，是一種嗜人類淋巴細(xì)胞的皰疹病毒。EBV是雙鏈DNA病毒，基因組長約172kb，在病毒顆粒中呈線性分子，進(jìn)入受感染細(xì)胞后，其DNA發(fā)生環(huán)化并能自我復(fù)制。
EBV基因編碼多種抗原，包括病毒衣殼抗原（viral capsid antigen,VCA）、核抗原（nuclear antigen,NA）、早期抗原（early antigen,EA）、膜抗原（membrane antigen,MA）等。
EBV感染與多種臨床疾病相關(guān)，如原發(fā)性EBV感染可引起傳染性單核細(xì)胞增多癥（infectious mononucleosis,IM），持續(xù)性或再激活EBV感染可引起慢性活動性EBV感染(chronic active EBV infection,CAEBV)和EBV相關(guān)噬血細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增生癥(EBV-associated haemophagocytic lymphohistiocytosis,EBV-HLH)等非腫瘤性重癥EBV相關(guān)疾病。EBV還是一種致腫瘤病毒，與許多腫瘤的發(fā)生相關(guān)，如鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）等。
常見的EBV 血清抗體標(biāo)志物包括EBV衣殼抗原IgM 抗體(EBV-VCA-IgM),EBV衣殼抗原IgG抗體（EBV-VCA-IgG）,EBV衣殼抗原IgA 抗體（EBV-VCA-IgA），EBV早期抗原IgM抗體（EBV-EA- IgM）,EBV早期抗原IgG 抗體（EBV-EA- IgG）,EBV早期抗原IgA 抗體（EBV-EA-IgA），EBV核抗原IgG抗體（EBV-NA-IgG），EBV核抗原IgA抗體（EBV-NA-IgA），Rta蛋白IgG抗體（EBV-Rta-IgG）,Zta蛋白IgA抗體(EBV-Zta-IgA ),EBV衣殼抗原IgG 抗體（EBV-VCA-IgG）親合力等。
機(jī)體感染EBV后針對不同的抗原產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。原發(fā)性EBV感染過程中首先產(chǎn)生針對VCA 的IgM/IgG（EBV-VCA-IgM/IgG）；在急性感染的后期，針對EA的IgG（EBV-EA-IgG)出現(xiàn)；在恢復(fù)期晚期，抗EBV核抗原IgG(EBV-NA-IgG)產(chǎn)生。
在EBV的臨床診斷中，同時檢測患者血清或血漿中數(shù)種EBV特異性抗體，可以提高診斷原發(fā)性EBV感染的敏感性和特異性，幫助判斷原發(fā)性EBV感染、既往感染或既往EBV感染再激活。
本指導(dǎo)原則適用于利用酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法等免疫學(xué)方法，對來源于血清或血漿等人體樣本中的EBV抗體進(jìn)行體外定性檢測，其臨床預(yù)期用途如下：
1. EBV感染的輔助診斷：除原發(fā)性EBV感染可致傳染性單核細(xì)胞增多癥外，EBV還可引起慢性活動性EBV感染。主要指標(biāo)包括EBV-VCA-IgM，EBV-VCA-IgG，EBV-NA-IgG。
2. 鼻咽癌的輔助診斷：EBV與鼻咽癌相關(guān)，有些EBV抗體也是目前臨床應(yīng)用的鼻咽癌輔助診斷的標(biāo)志物。
本指導(dǎo)原則不適用于鼻咽癌的篩查。
對基于其他方法學(xué)的試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述內(nèi)容不夠全面，申請人可以參照本指導(dǎo)原則，根據(jù)產(chǎn)品特性對適用部分進(jìn)行評價或補(bǔ)充其他的評價資料進(jìn)行相應(yīng)驗證。
二、注冊審查要點(diǎn)
（一）監(jiān)管信息
1. 產(chǎn)品名稱及分類編碼
產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》（國家市場監(jiān)督管理總局令第48號）及相關(guān)法規(guī)的要求，如EB病毒抗體檢測試劑（化學(xué)發(fā)光法）。根據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。
2. 其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。
（二）綜述資料
綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、主要研究結(jié)果的總結(jié)評價以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。預(yù)期用途需要明確本產(chǎn)品待測物以及適用場景、人群和相應(yīng)的疾病診斷的價值。產(chǎn)品描述中應(yīng)說明產(chǎn)品所采用的檢測原理，選擇夾心法、捕獲法或間接法的理由。同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從預(yù)期使用人群、適用場景、檢測原理、特異性抗原等主要組成成分、樣本類型等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。
（三）非臨床資料
1. 產(chǎn)品技術(shù)要求
申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。
EBV抗體檢測試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括：物理性狀、陽性參考品符合率、陰性參考品符合率、重復(fù)性、最低檢測限等。
按照《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》的規(guī)定，此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，申請人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料和生產(chǎn)工藝，附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫規(guī)范的要求。
2. 分析性能研究
申請人應(yīng)提交在符合質(zhì)量管理體系的生產(chǎn)環(huán)境下生產(chǎn)的試劑進(jìn)行的所有性能評估資料，包括具體研究方法、試驗方案、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能評估的背景信息也應(yīng)在申報資料中進(jìn)行描述，包括試驗地點(diǎn)，采用的試劑名稱、規(guī)格和批號，儀器名稱和型號，樣本類型和來源等。分析性能評估的試驗方法可以參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評估的指導(dǎo)原則進(jìn)行，建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究。EBV 不同類型抗體（IgM/IgG/IgA）的性能應(yīng)分別研究。
2.1樣本穩(wěn)定性
一般包括樣本各種實際運(yùn)輸及儲存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗證，以確認(rèn)樣本的保存條件及保存時間?？梢栽诤侠淼臏囟确秶鷥?nèi)，每間隔一定的時間段即對儲存樣本進(jìn)行驗證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。可冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行合理驗證。
2.2適用的樣本類型
如果試劑適用于多種樣本類型，應(yīng)分別評價每種樣本類型的適用性。如產(chǎn)品適用于血清和血漿，可采用同源比對驗證樣本的可比性和各種抗凝劑的適用性。
2.3企業(yè)參考品檢驗（如適用）
根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗并提供詳細(xì)的試驗數(shù)據(jù)。
2.4準(zhǔn)確度
應(yīng)采用臨床樣本驗證該類產(chǎn)品的準(zhǔn)確度，樣本類型與說明書聲稱的樣本類型一致，應(yīng)包含所有抗體類型。可以采用方法學(xué)比對、檢測參考盤等方式驗證。
參考盤需要其他成熟方法檢測確認(rèn)過，且有準(zhǔn)確臨床診斷信息，由多份樣本組成的一套樣本。
提供所有試驗用樣本的來源、抗體類型、抗體濃度/滴度確認(rèn)等詳細(xì)資料。
2.5精密度
申請人應(yīng)對精密度指標(biāo)的評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如變異系數(shù)的范圍等。應(yīng)對可能影響檢測精密度的主要變量進(jìn)行驗證，包括不同時間、地點(diǎn)、操作者、檢測輪次、試劑批次、適用儀器（如適用）等。
設(shè)定合理的精密度評價周期，例如：為期至少20天的檢測。至少采用3個水平的臨床樣本進(jìn)行精密度評價，具體要求如下：
陰性樣本：待測物濃度低于最低檢測限或為零濃度，陰性檢出率應(yīng)為100%（n≥20）。
臨界陽性樣本：待測物濃度略高于試劑的最低檢測限，陽性檢出率應(yīng)為100%（n≥20）。
中/強(qiáng)陽性樣本：待測物濃度呈中度到強(qiáng)陽性，陽性檢出率為100%，變異系數(shù)（CV）應(yīng)在合理的可接受范圍內(nèi)（如適用）（n≥20）。
2.6包容性
應(yīng)選擇來源于不同時間、不同地域的多份臨床確診且經(jīng)合理方法確定EBV抗體陽性的患者樣本進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果應(yīng)與預(yù)期結(jié)果相符。驗證用樣本的抗體水平應(yīng)接近最低檢測限水平，可采用臨床陰性樣本進(jìn)行稀釋。
2.7最低檢測限
建議采用已明確EBV抗體濃度/滴度的臨床陽性樣本，采用陰性樣本進(jìn)行系列稀釋，進(jìn)行最低檢測限的建立和驗證。
提供所有試驗用樣本的來源、抗體類型、抗體濃度/滴度確認(rèn)等詳細(xì)資料。
2.7.1選取至少3份臨床樣本，系列稀釋獲得多個濃度梯度，每個濃度重復(fù)檢測不少于3次，以100%可檢出的最低濃度水平作為預(yù)設(shè)檢測限。在此濃度附近制備若干濃度梯度樣本，每個濃度至少重復(fù)檢測20次，將具有95%陽性檢出率的最低濃度作為最低檢測限。
2.7.2選擇與2.7.1不同的3份臨床樣本，采用陰性基質(zhì)稀釋到最低檢測限濃度水平進(jìn)行驗證，應(yīng)達(dá)到95%陽性檢出率。
2.8分析特異性
2.8.1交叉反應(yīng)
應(yīng)對EBV的近緣微生物抗體，易引起相同或相似的臨床癥狀，及易合并感染的微生物抗體（表1）進(jìn)行交叉反應(yīng)驗證。
如果試劑原料采用基因重組抗原，則還需考慮對重組基因?qū)胛⑸锾禺愋钥贵w的交叉反應(yīng)評價。例如采用大腸埃希菌作為宿主菌進(jìn)行重組抗原的表達(dá)，建議考慮大腸埃希菌抗體陽性樣本可能產(chǎn)生的交叉反應(yīng)。
交叉反應(yīng)用臨床樣本中相關(guān)病原體抗體滴度水平應(yīng)較高，并且抗體類型（IgM/IgG/IgA）應(yīng)與申報試劑檢測抗體類型一致。
提供所有試驗用樣本的來源、抗體類型、抗體濃度/滴度確認(rèn)等信息。
表1 用于交叉反應(yīng)研究的病原體抗體陽性血液樣本
病原體 |
單純皰疹病毒1型（人類皰疹病毒1型） |
單純皰疹病毒2型（人類皰疹病毒2型） |
水痘-帶狀皰疹病毒（人類皰疹病毒3型） |
巨細(xì)胞病毒（人類皰疹病毒5型） |
人皰疹病毒6型 |
人皰疹病毒7型* |
人皰疹病毒8型* |
乙型肝炎病毒 |
肺炎支原體 |
風(fēng)疹病毒 |
弓形蟲 |
人類免疫缺陷病毒* |
梅毒螺旋體* |
甲型流感病毒* |
腺病毒* |
注：＊項為選擇性驗證
2.8.2干擾試驗
應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，選擇適用的干擾物質(zhì)進(jìn)行研究。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）下，采用待測抗體為弱陽性和陰性水平的多例樣本進(jìn)行試驗，應(yīng)至少包括下列可能的干擾物質(zhì)。
內(nèi)源性干擾物質(zhì)：血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯、類風(fēng)濕因子、其他自身免疫性抗體、異嗜性抗體（如HAMA）、總IgG、總IgM、高濃度EBV特異性IgG抗體與特異性IgM抗體的相互干擾等。
常見治療性藥物：評估常見的用于EB病毒感染治療的外用或內(nèi)服藥物是否會對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。
2.9 IgM抗體破壞試驗
對于EBV IgM抗體檢測試劑，建議對至少5份含有EBV特異性IgM抗體的樣本進(jìn)行IgM破壞試驗研究，方法為采用特定的化學(xué)制劑（如2－巰基乙醇或二硫蘇糖醇）處理樣本后，重新進(jìn)行檢測，IgM檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。
2.10鉤狀（HOOK）效應(yīng)研究
須采用多份高滴度樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度分別檢測，每個梯度的稀釋液重復(fù)3～5次，對鉤狀效應(yīng)進(jìn)行合理的驗證。
2.11其他需注意問題
對于使用儀器進(jìn)行結(jié)果判讀的產(chǎn)品，應(yīng)提供產(chǎn)品說明書【適用儀器】項中所有型號儀器的性能評估資料。
2.12反應(yīng)體系
反應(yīng)體系研究資料包括樣本的制備方式（采集和處理）、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、質(zhì)控方法、結(jié)果判讀方式等。
反應(yīng)條件確定：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、洗滌液體積和洗滌次數(shù)（如涉及）等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。
反應(yīng)體系中樣品加樣方式及加樣量確定：通過試驗確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對樣本稀釋液及其用量、其他必要的處理方法等進(jìn)行研究。對于IgM抗體檢測試劑，如采用間接法，建議考慮高濃度特異性IgG對結(jié)果的影響，合理設(shè)置樣本中去除IgG步驟（例如采用含有IgG吸附劑的樣本稀釋液等），或者詳述產(chǎn)品設(shè)計中關(guān)于避免IgG影響IgM檢測結(jié)果的合理措施，盡量減少特異性IgG對IgM檢測造成的假陰性和假陽性。
3. 穩(wěn)定性研究
主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、開瓶（開封）穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性（如涉及）、機(jī)載穩(wěn)定性（如涉及）、運(yùn)輸穩(wěn)定性等研究。如果產(chǎn)品配套校準(zhǔn)品，還應(yīng)對校準(zhǔn)頻率進(jìn)行研究。申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、接受標(biāo)準(zhǔn)、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。
4. 陽性判斷值研究
提交對申報試劑陰性/陽性結(jié)果判斷的陽性判斷值（cut-off）研究資料，包括具體的試驗方案、人群選擇、評價標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計學(xué)分析和研究數(shù)據(jù)等。建立陽性判斷值的人群選擇應(yīng)考慮不同的地理區(qū)域、不同的感染階段和生理狀態(tài)等因素的影響，納入陰性、陽性及臨界值附近的樣本。如檢測結(jié)果為數(shù)值形式，建議采用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）的分析方式來確定合理的陽性判斷值；如試驗結(jié)果存在灰區(qū)（equivocal zone），應(yīng)明確灰區(qū)建立的基礎(chǔ)。
建議按照本產(chǎn)品預(yù)期用途中適用人群進(jìn)行研究，不同預(yù)期用途和適用人群，需要分別入組獨(dú)立研究。
如產(chǎn)品適用多個樣本類型，應(yīng)明確不同的樣本類型是否存在差異，如無差異，可采用一個樣本類型進(jìn)行陽性判斷值確定后，對其他樣本類型進(jìn)行驗證。如有差異，應(yīng)分別進(jìn)行陽性判斷值的確定。
另外，建議申請人通過臨床評價進(jìn)一步驗證和確認(rèn)陽性判斷值的準(zhǔn)確性。
5. 其他資料
5.1主要原材料研究資料
此類產(chǎn)品的主要原材料一般包括抗原、抗體、質(zhì)控品/校準(zhǔn)品和企業(yè)參考品等。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細(xì)的制備、鑒定和質(zhì)量控制過程，其制備工藝必須相對穩(wěn)定；如主要原材料源于外購，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對比篩選試驗資料、選定的供應(yīng)商名稱，供應(yīng)商提供的原材料檢驗報告（質(zhì)量證書），以及該原材料到貨后的入廠檢驗報告，供應(yīng)商為原材料的生產(chǎn)商，不得隨意更換。申請人應(yīng)對各主要原材料均明確質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
5.1.1 EBV抗原
EBV抗原決定了檢測的敏感度和特異性，對抗體檢測試劑至關(guān)重要。應(yīng)注重抗原的選擇，詳細(xì)描述抗原的名稱，天然/重組表達(dá)信息、抗原表位及選擇該抗原的依據(jù)。提交抗原來源、制備、純化、鑒定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、功能性試驗等）等詳細(xì)試驗資料。
5.1.2 抗人IgM/IgG/IgA單克隆抗體
詳述抗體的選擇過程，提交抗體生物學(xué)來源、免疫原及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（如：外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價、功能性試驗等）等詳細(xì)試驗資料。
5.1.3 質(zhì)控品/校準(zhǔn)品
質(zhì)控品應(yīng)至少包含陰性和弱陽性兩個水平。弱陽性質(zhì)控品/校準(zhǔn)品可選擇經(jīng)合理稀釋的臨床陽性樣本或人源化抗體，陰性質(zhì)控品/校準(zhǔn)品可選擇臨床陰性樣本或陰性基質(zhì)等。提交相關(guān)原料的來源、選擇、陰/陽性確認(rèn)、基質(zhì)效應(yīng)等相關(guān)研究資料。企業(yè)應(yīng)對質(zhì)控品的檢測結(jié)果做出明確的范圍要求。校準(zhǔn)品應(yīng)提交詳細(xì)的制備、溯源等資料。
5.1.4 其他主要原材料
除上述主要原材料外，產(chǎn)品中包含的其他主要原材料，如辣根過氧化物酶、吖啶酯、微孔板、磁微粒等，均應(yīng)進(jìn)行驗證，并提交相關(guān)資料。明確主要原材料的供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
5.1.5 企業(yè)參考品
企業(yè)參考品是保證產(chǎn)品性能穩(wěn)定的重要構(gòu)成之一。應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、陰陽性或濃度/滴度確認(rèn)方法等相關(guān)驗證資料。企業(yè)參考品的基質(zhì)應(yīng)與待測樣本相同。企業(yè)參考品的設(shè)置應(yīng)至少包括：陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品和重復(fù)性參考品。其中陽性參考品應(yīng)選擇多個臨床樣本，并設(shè)置不同滴度水平。陰性參考品建議包括含有類風(fēng)濕因子、自身抗體、其他病原體抗體（皰疹病毒1型、2型、3型、5型）等可能的干擾和交叉樣本，對于檢測EBV IgM抗體的試劑，陰性參考品中建議包括EBV IgG抗體陽性樣本。檢測限參考品可設(shè)置臨床陽性樣本的系列稀釋樣本，其中應(yīng)包含最低檢測限附近水平。重復(fù)性參考品可設(shè)置至少兩個水平的臨床陽性樣本,包括最低檢測限附近水平。對于同時檢測EBV 不同類型抗體（IgM/IgG/IgA）的試劑，企業(yè)參考品需對產(chǎn)品中的不同類型EBV抗體（IgM/IgG/IgA）分別設(shè)置。
5.2生產(chǎn)工藝研究資料
5.2.1產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。
5.2.2主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。
5.2.3包被/標(biāo)記工藝研究，申請人應(yīng)考慮如包被/標(biāo)記液量、濃度、時間、條件等指標(biāo)對產(chǎn)品性能的影響，通過實驗確定上述指標(biāo)的最佳組合。
5.2.4顯色系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹以及最適條件研究。
（四）臨床試驗
開展EBV抗體檢測試劑臨床試驗應(yīng)滿足《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家藥品監(jiān)督管理局2021年第72號通告）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗應(yīng)符合更新后的要求。下面僅說明該類產(chǎn)品臨床試驗中應(yīng)關(guān)注的重點(diǎn)問題。
1. 臨床試驗機(jī)構(gòu)及人員
申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)EBV流行情況等因素選擇具有代表性的機(jī)構(gòu)開展臨床試驗，包括受試人群的代表性等，選擇不少于3家（含3家）符合法規(guī)要求的臨床試驗機(jī)構(gòu)開展臨床試驗。參與臨床試驗的人員經(jīng)培訓(xùn)后應(yīng)熟悉相關(guān)檢測技術(shù)的原理、適用范圍、操作方法等，并能夠?qū)z測結(jié)果進(jìn)行正確判讀。在整個試驗中，試驗體外診斷試劑和對比試劑/方法都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。
2. 針對“EBV感染的輔助診斷”預(yù)期用途
2.1 臨床試驗適用人群和臨床樣本
具有EBV感染相關(guān)癥狀的患者，如傳染性單核細(xì)胞增多癥，慢性活動性EBV感染，EBV-HLH等；需與EBV感染進(jìn)行鑒別診斷的其他疾病患者，如其他皰疹病毒感染患者，弓形蟲感染患者等。
臨床試驗所用樣本一般為血清或血漿。臨床樣本的采集、處理和保存等應(yīng)分別滿足試驗體外診斷試劑說明書、對比試劑說明書的相關(guān)要求。
2.2 臨床試驗方法
對于EBV-VCA-IgM，EBV-VCA-IgG，EBV-NA-IgG，原則上選擇已上市同類產(chǎn)品作為對比試劑，評價試驗體外診斷試劑的臨床檢測性能。
對于特異性IgM抗體，申請人還應(yīng)對試驗體外診斷試劑在急性感染患者中的檢出率進(jìn)行評價，病例數(shù)不少于30例，急性感染患者應(yīng)為原發(fā)性EBV感染，并有典型的急性感染的臨床癥狀。
入組人群應(yīng)能夠代表產(chǎn)品目標(biāo)人群的各種特征，而不應(yīng)僅入組部分典型病例。應(yīng)注意，入組樣本應(yīng)該有一定量的新鮮樣本。在合理控制偏倚的前提下，亦可入組既往留存的病例樣本。入組的既往病例，其樣本保存條件應(yīng)滿足試驗體外診斷試劑和對比試劑的要求。
2.3 最低樣本量和陽性例數(shù)
適當(dāng)?shù)臉颖玖渴潜ＷC試驗體外診斷試劑臨床性能得到準(zhǔn)確評價的必要條件。臨床試驗樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行估算。根據(jù)相應(yīng)臨床試驗設(shè)計，可選擇陰性符合率和陽性符合率，分別估算最低陰性樣本例數(shù)和陽性樣本例數(shù)。
如臨床試驗采用試驗體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比對的試驗設(shè)計，可采用單組目標(biāo)值法樣本量公式估算最低樣本量。
公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分位數(shù)，P0為評價指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為試驗體外診斷試劑評價指標(biāo)預(yù)期值。
基于現(xiàn)有認(rèn)知，評價指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）即IgM/IgG抗體試劑陽性符合率和陰性符合率原則上建議不低于90%。如產(chǎn)品臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置低于90%，應(yīng)在臨床試驗方案中給予充分合理的解釋。當(dāng)評價指標(biāo)P接近100%時，上述樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算，如精確概率法等。
樣本量估算過程中需要考慮臨床試驗中病例的剔除率，一般而言，病例剔除率不應(yīng)高于10%。此外，臨床試驗應(yīng)納入一定數(shù)量的弱陽性樣本。
如臨床試驗研究有更合理的樣本量估算方式，在說明其合理性后亦可采用。
3. 針對“鼻咽癌的輔助診斷”預(yù)期用途
3.1 臨床試驗適用人群和臨床樣本
應(yīng)入組疑似鼻咽癌患者；需進(jìn)行鑒別診斷的其他疾病患者，如鼻咽部淋巴瘤（如NK/T淋巴瘤， Burkitt等），頭頸部腫瘤等。
臨床試驗所用樣本一般為血清或血漿。臨床樣本的采集、處理和保存等應(yīng)分別滿足試驗體外診斷試劑說明書、對比試劑說明書（如適用）的相關(guān)要求。
3.2 臨床試驗方法
如申報此預(yù)期用途，應(yīng)設(shè)計科學(xué)的臨床試驗，與鼻咽癌臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對比，對抗體標(biāo)志物的臨床意義進(jìn)行充分驗證。如有同類產(chǎn)品已上市，還應(yīng)與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較，確認(rèn)產(chǎn)品的臨床性能。
3.3 最低樣本量和陽性例數(shù)
臨床試驗樣本量應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行估算，并詳細(xì)描述所使用統(tǒng)計方法及各參數(shù)的確定依據(jù)。
4. 臨床試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法對臨床試驗結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，對于試驗體外診斷試劑與對比試劑/方法的一致性評價，一般選擇2×2表的形式總結(jié)兩種試劑/方法的檢測結(jié)果，并據(jù)此計算陽性符合率/靈敏度、陰性符合率/特異度、總符合率、Kappa值等指標(biāo)及其置信區(qū)間。
對于不一致樣本，應(yīng)進(jìn)行原因分析。如臨床試驗方案規(guī)定采用其他方法進(jìn)行確認(rèn)，則確認(rèn)結(jié)果不應(yīng)納入統(tǒng)計分析。
針對鼻咽癌輔助診斷用途，申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品應(yīng)用的地域差異，臨床試驗機(jī)構(gòu)的選擇和臨床試驗方案設(shè)計應(yīng)避免由于中心效應(yīng)所帶來的潛在偏倚。
5．倫理學(xué)要求
臨床試驗必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則，必須獲得臨床試驗機(jī)構(gòu)倫理委員會的同意。研究者應(yīng)充分考慮臨床試驗用樣本的獲得和試驗結(jié)果對受試者的風(fēng)險性，應(yīng)提交倫理委員會的審查意見。
6. 質(zhì)量控制
臨床試驗開始前，建議進(jìn)行臨床試驗的培訓(xùn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗誤差。整個試驗過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。
7. 臨床試驗方案
體外診斷試劑臨床試驗應(yīng)按照同一臨床試驗方案在多家臨床試驗機(jī)構(gòu)開展，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機(jī)構(gòu)的實驗室內(nèi)并由該實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉試驗進(jìn)程。
試驗方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程和結(jié)果判定時，應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各臨床試驗機(jī)構(gòu)選用的對比試劑/方法應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，應(yīng)考慮試驗體外診斷試劑樣本類型與對比試劑/方法樣本類型的可比性；如有差異，需提供充分的驗證。
8. 臨床試驗報告
應(yīng)對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。
（五）產(chǎn)品說明書
產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，進(jìn)口體外診斷試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。
結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，EBV抗體檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容。
1．【預(yù)期用途】
1.1該產(chǎn)品用于體外定性檢測人血清/血漿樣本中的EBV XX抗體。
1.2結(jié)合臨床和其他實驗室指標(biāo)，用于EBV感染/鼻咽癌的輔助診斷。
1.3臨床背景描述：簡單介紹病原體的生物學(xué)特征、流行病學(xué)、潛伏期、易感人群、感染后的臨床表現(xiàn)及相關(guān)疾病等。簡要介紹現(xiàn)有的EBV臨床或?qū)嶒炇以\斷方法。
2.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：
2.1樣本采集：明確采集時間、采集順序、采集量等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。說明采集方法及樣本類型，對于血漿、全血樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。
2.2干擾物的影響：明確常見干擾物對試驗結(jié)果是否產(chǎn)生影響，明確可接受的最大干擾物濃度。
2.3樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、冷凍等）及不同保存條件下的保存時限和運(yùn)輸條件等。冷藏、冷凍樣本檢測前是否需要恢復(fù)室溫，冷凍樣本的凍融次數(shù)限制等。
3.【檢驗方法】
詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟：
3.1試驗環(huán)境：實驗室的溫度、濕度要求，檢測試劑及樣本的復(fù)溫要求等。
3.2試劑配制方法，試劑開封后使用方法、定標(biāo)（如適用）等。
3.3高濃度樣本稀釋的方法。
3.4試驗條件：操作步驟、溫度、時間、儀器波長（如適用）等。
3.5質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求，質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。
3.6 特別說明檢驗操作過程中的注意事項。
4.【陽性判斷值】說明陽性判斷值，并簡要說明陽性判斷值確定的試驗方法。如陽性判斷值(CO值)需進(jìn)行計算確定，詳細(xì)描述具體計算方法。
5.【檢驗結(jié)果的解釋】
結(jié)合質(zhì)控品/校準(zhǔn)品以及樣本的檢測結(jié)果，對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。檢驗結(jié)果的解釋應(yīng)以陽性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。如有適用的臨床診療指南，則應(yīng)在此項下引用，相應(yīng)檢驗結(jié)果的解釋應(yīng)符合相關(guān)指南的要求。如有灰區(qū)判定，詳細(xì)說明灰區(qū)樣本的處理方法。
6.【檢驗方法局限性】
綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明，建議包括以下內(nèi)容：
6.1 本試劑盒的檢測結(jié)果不得作為臨床診治的唯一依據(jù)，對患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。
6.2不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、處理及不當(dāng)?shù)脑囼灢僮骱驮囼灜h(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果。
6.3感染初期，抗體可能未產(chǎn)生或者產(chǎn)生水平低于產(chǎn)品最低檢測限，而產(chǎn)生陰性結(jié)果。檢測陰性不能排除急性感染，對于可疑的樣本建議進(jìn)行病原學(xué)檢測，或至少間隔7天再次檢測。
6.4評價血清學(xué)檢測結(jié)果時需要結(jié)合患者的臨床病程、基礎(chǔ)狀況以及年齡等因素綜合考慮，如：免疫功能低下/缺陷的人群、產(chǎn)生抗體能力較低的嬰幼兒，可能不產(chǎn)生或產(chǎn)生低滴度的抗體，其血清學(xué)抗體檢測的參考價值有限。
6.5在近幾個月內(nèi)接受過輸血或其他血液制品治療的人群，對其陽性檢測結(jié)果的分析應(yīng)慎重。
6.6 EBV IgG抗體在部分治愈患者體內(nèi)持續(xù)存在，短期內(nèi)再次感染的患者確診應(yīng)進(jìn)行EBV的抗體滴度動態(tài)檢測或核酸定量檢測以進(jìn)行佐證。
7.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
詳述以下性能指標(biāo)：參考盤/方法學(xué)比對、最低檢測限、包容性、精密度、分析特異性（交叉反應(yīng)和干擾試驗）、鉤狀（HOOK）效應(yīng)等。介紹所用樣本背景信息、數(shù)量、濃度，評價方法及檢測結(jié)果。
8.【注意事項】
應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：
8.1有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組分（如有）生物安全性的警告。如：試劑盒內(nèi)質(zhì)控品/校準(zhǔn)品或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人類免疫缺陷病毒1/2型抗體（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗體（HCV-Ab）等項目的檢測，結(jié)果為陰性，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。
8.2有關(guān)試驗操作、樣本保存及處理等其他注意事項。
三、參考文獻(xiàn)
[1]《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》（國家市場監(jiān)督管理總局令第48號）[Z].
[2]《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號）[Z].
[3]《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2021年第72號）[Z].
[4]《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第17號）[Z].
[5]《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）[Z].
[6]全國兒童EB病毒感染協(xié)作組,EB病毒感染實驗室診斷及臨床應(yīng)用專家共識,中華實驗和臨床病理學(xué)雜志[J]，2018.